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基因染料法PCR試劑盒(50T)

簡(jiǎn)要描述:

基因染料法PCR試劑盒(50T)產(chǎn)品特點(diǎn):◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應,無(wú)非特異性擴增;◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝。

更新時(shí)間:2023-09-08

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基因染料法PCR試劑盒(50T)

基因染料法PCR試劑盒(50T)產(chǎn)品特點(diǎn):

◇高特異性:與其他病毒無(wú)交叉反應,無(wú)非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡(jiǎn)便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

準備物品:

清理液(A):毫升

染色液(t B):微升

稀釋液(C):毫升

溶解液(tD):毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū):1份






 

基因染料法PCR試劑盒(50T)PCR反應的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實(shí)性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結合是關(guān)鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細胞中檢出一個(gè)靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細菌。

(3) 簡(jiǎn)便、快速

PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時(shí)完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。

(4) 對標本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

注意事項:

①加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時(shí)間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

④底物A應揮發(fā),避免長(cháng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對光敏感,避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗完成后應立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標板時(shí)應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實(shí)驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

⑧試劑應按標簽說(shuō)明書(shū)儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過(guò)后的標準品應丟棄,不可保存。

⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

反應五要素:

參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

①引物長(cháng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長(cháng)至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過(guò)多易出現非特異條帶。ATGC機分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會(huì )形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個(gè)堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無(wú)明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結果為好,引物濃度偏高會(huì )引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會(huì )。

10-?;?3,7-二羥基吩嗪20mg

CCL26 Signal peptide核因子1A抗體

CCL26環(huán)一螺旋蛋白1抗體

chemerin腫瘤轉移抑制基因H4抗體

C5orf55 神經(jīng)元衍生孤兒受體1抗體

CXCR7軸突生長(cháng)誘向因子4抗體

COX7A2脊髓灰質(zhì)炎病毒受體相關(guān)蛋白4抗體

CD36細胞核因子/k基因結合核因子 p52/p100抗體

CYP11B2線(xiàn)粒體復合物NDUFS7蛋白抗體

基因染料法PCR試劑盒犀草進(jìn)口/國產(chǎn)phospho-c-Abl(Thr754)  酸化非受體酪氨酸激酶c-Abl抗體含量:HPLC≥98%

木犀草苷進(jìn)口/國產(chǎn)FUCA1/Alpha L fucosidase I  α-L巖藻糖苷酶抗體含量:HPLC≥98%

沒(méi)食子酸進(jìn)口/國產(chǎn)TNFR1/TNF Receptor I  腫瘤壞死因子受體1抗體含量:HPLC≥98%

蒙花苷進(jìn)口/國產(chǎn)HHV8/ORF K14  人類(lèi)皰疹病8 ORF14抗體含量:HPLC≥97%

莽草酸進(jìn)口/國產(chǎn)SEMA6D  軸突導向因子SEMA6D抗體含量:HPLC≥98%

芹菜進(jìn)口/國產(chǎn)plant lectin B4/IB4  植物凝集IB4含量:HPLC≥98%

青藤進(jìn)口/國產(chǎn)SNX1/Sorting nexin1  分選連接蛋白1抗體含量:HPLC≥98%

 

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